Wie zu Tun

Schritt 1

Verdnnen Fngerantikrper bis 5 ug / ml in 50 mM NaHCO2 (pH 9,6). Dann werden 50 uL in jede Vertiefung der Probe Schssel zu Testzwecken verwendet. Deckel mit Kunststoff oder Aluminium und ber Nacht bei 4 C auf einem Schttler.

Schritt 2

Dump aus Fngerantikrper waschen und zweimal mit 200 uL PT-Puffer. Fgen Sie UL 200 von Blocking-Puffer pro Well (PB oder 5 Prozent Magermilch). Inkubieren berall von zwei Stunden bis ber Nacht unter Schtteln bei 4 C.

Schritt 3

Dump aus Blocking-Puffer waschen und 4 mal mit 200 uL PT-Puffer. Add “Sonde” Protein-Proben bei verschiedenen Konzentrationen in PB oder 5 Prozent Magermilch, Zugabe von 100 ul pro Well. Inkubieren einer Stunde Schtteln bei 4 C. auskippen Sonde Lsungen und waschen sechsmal mit 200 uL PT-Puffer.

Schritt 4

Add Detektionsantikrper (HRP-konjugierte Antikrper) verdnnt 1:4000 in PB-Puffer oder 5 Prozent fettarmer Milch (entweder mit 0,05 Prozent Tween-20), Zugabe von 50 ul pro Probe gut. Inkubieren Sie fr 30 Minuten bis eine Stunde Schtteln bei 4 C.

Schritt 5

Dump aus Detektionsantikrper Lsung und waschen 6 mal mit 200 uL PT-Puffer pro Vertiefung, durch Waschen zweimal mit 200 uL von 1x PBS (Phosphat-gepufferte Kochsalzlsung gefolgt). Dump aus PBS und fgen Sie 100 ul pro Well Nachweisreagenz (fr HRP, verwenden frisch gemischten TMB-Reagenz durch Mischen von TMB und Wasserstoffperoxid bei 1:1). Inkubieren Sie fr 15 Minuten bei Raumtemperatur mehrmals schtteln. Bei der Verwendung von TMB und HRP: Schlielich, fgen Sie 100 ul 1M H3PO4 (Phosphorsure) pro Vertiefung, um die TBM reaction.Read Platte mit Probenanalyse Leser, wie eine 96-Well-Platte Leser zu stillen. (Fr HRP und TMB, verwenden Sie den “End-Point-ELISA-Test”-Vorlage auf die meisten Leser.)